氨基酸分析检测仪器通常使用高效液相色谱法(HPLC)进行定量测定。以下是一般的氨基酸定量测定方法:
样品制备:
样品准备:将待测样品中的氨基酸进行适当的提取和预处理,通常采用酸或碱水解、蛋白酶消化等方法,将氨基酸从样品中释放出来。
蛋白去除:如果样品中存在大量的蛋白质,需要先进行蛋白去除的处理,以避免对后续分析的干扰。
HPLC分析:
样品进样:将经过预处理的样品溶液通过自动进样装置注入到HPLC系统中。
色谱柱选择:选择适当的色谱柱,通常采用具有氨基功能团的反相色谱柱,如ODS(OctadecylSilane)柱。
洗脱条件:设置适当的洗脱条件,包括流动相的组成和流速等参数。通常采用缓冲盐溶液和有机溶剂的混合物作为流动相。
检测方法:选择适当的检测波长,常见的是在190-220nm范围内进行紫外检测。
校正曲线:通过使用已知浓度的标准氨基酸溶液建立校正曲线,确定各个氨基酸的浓度与峰面积的关系。
定量测定:根据样品中各氨基酸的峰面积和校正曲线,计算出各氨基酸的浓度。
数据处理:
浓度计算:根据色谱图上各氨基酸的峰面积和校正曲线,计算出各氨基酸的浓度。
质量分析:对测得的氨基酸浓度数据进行质量分析,确保结果的准确性和可靠性。
这是常规的氨基酸分析检测仪器的定量测定方法。在实际操作中,还需要根据具体的仪器型号和试剂盒说明进行操作,以确保测试的准确性和可靠性。